Abychom pochopili význam prodloužené kultivace, je dobré vědět, co vlastně znamená kultivace jako taková. Jde o cílené udržování či rozmnožování buněk v podmínkách in vitro, tedy mimo tělo.

U metod asistované reprodukce způsobem IVF se 2-6 hodin po odebrání vajíček vajíčko oplodňuje vybranými spermiemi. Při pozorování procesu v Petriho misce se vyčkává zhruba 18 hodin, zda se spermie s vajíčkem spojí, pokud ne, zavádějí se spermie do vajíček přímo metodou intracytoplazmatické injekce spermie (ICSI)². Následně dochází k procesu kultivace - embrya jsou kultivována dva až tři dny, během níž se dělí, než se dostanou do stadia 2–4 buněk.

Standardní kultivace probíhá 72 hodin, po kterých se embrya vkládají do dělohy. Při prodloužené kultivaci jsou embrya kultivována ve speciálních roztocích, umožňujících jejich růst do vyšších embryonálních stadií.

Prodloužená kultivace trvá 120-144 hodin, čili pět až šest dní, a hlavní výhodou, která prodloužená kultivace přináší je, že embrya v ní dosáhnou fáze tzv. blastocysty, což znamená, že je rozděleno na 4-8 buněk.

Popis obrázku: Fotografie blastocysty pořízené mikroskopem

Proč si mám zvolit prodlouženou kultivaci?

Prodloužená kultivace se dá považovat za modernější postup, nejen díky využívání nejnovějších technologií při jeho pozorování, ale také díky zmenšení všech rizik, které vznikají při manipulaci s embryi před vložením do dělohy. Výhod využití prodloužené kultivace oproti standardní době před přenosem při umělém oplodnění²⁴ je tedy více.

Největší výhoda spočívá v prodloužené době, během níž embryolog může vývoj sledovat, a také další vývojová fáze, které embryo po delší době kultivace dosáhne.

Pro embryology na klinice asistované reprodukce¹¹, do jejíž péče jste se svěřila, umožňuje prodloužená kultivace lépe určit ta nejkvalitnější embrya a zvýšit tak šanci na úspěch léčby. Ti sledují proces kultivace jednou denně za pomocí mikroskopu anebo pomocí nejnovějších přístrojových technologií každých 20 minut. Některé kliniky používají i nepřetržité sledování za pomocí kamery. Z videozáznamu a dalších získaných informací se pak vyhodnocuje nejvhodnější embryo a zároveň se vyloučí ta embrya, která se přestanou během své předešlé vývojové fáze vyvíjet a nejsou tedy schopna zajistit vznik těhotenství²⁴.

Další výhodou, která podporuje metodu permanentního monitoringu embryí, je skutečnost, že embrya nejsou během kultivace vyjmuta z inkubátoru a není tak narušeno jejich přísně sledované prostředí. Standardní analýza vyžadovala jejich každodenní přesun z inkubátoru pod mikroskop.

Další výhodou prodloužené kultivace je také možnost provést vyšetření v rámci Preimplantační genetické diagnostiky (PGD) na buňce nebo shluku buněk získaných z embrya biopsií třetí nebo pátý den jejich vývoje po oplození.

Prodloužená kultivace je prospěšná i ve snaze redukovat vícečetná těhotenství a jeho rizika. Časté sledování vývoje embryí a jejich přesnější výběr pro přesun do dělohy³ umožňuje embryologovi vybrat embrya co nejkvalitnější, s předpokládanou dobrou životaschopností - a ta je spolehlivěji předvídána právě při dostatečně dlouhé kultivaci (do 5.-6. dne).

Velkým přínosem prodloužené kultivace je potom také hlavně to, že při delší době vyčkávání na dělení buněk dosáhnou embrya fáze blastocysty, což znamená, že je rozděleno na 4-8 buněk, které jsou odolnější proti poškození a je snadnější z nich vybírat.

Výhody biopsie ve stadiu blastocysty

• embryo je méně traumatizované,
•  odstraní se přibližně 5 buněk, což nemá na embryo žádný vliv, jako kdyby se dělala biopsie v ranějším stadiu,
• vyšší úspěšnost IVF⁵.

Nevýhody biopsie ve stadiu blastocysty

• vyšší finanční náklady,
• embrya se musí vyvinout do stadia blastocysty, ne vždy embrya přežijí do tohoto stadia.

Nevýhody testování embrya třetí den po oplodnění

• třetí den po oplodnění embryo obsahuje přibližně 6-10 buněk a buňky embrya jsou velké,
• biopsie vyžaduje u třídenního embrya vytvoření většího otvoru, čímž hrozí, že se buňky oddělí,
• embryo ztratí významnou část svého objemu.

Transfer embrya do dělohy ve fázi blastocysty je nejvíce podobný přirozenému procesu početí, jelikož při přirozeném otěhotnění dochází k přichycení v děloze a proniknutí embrya do děložní sliznice ve stejném časovém období a fázi embrya, jako při přirozeném početí.

Předčasné zavedení embrya do dělohy (tzn. ve stadiu rýhování) může budoucímu miminku způsobit tzv. buněčný stres, který je následován poškozením vývoje a ztrátou životaschopnosti embrya.

Video: Vývoj embrya (špatné vs. dobré) od oplodnění do 5.dne, zachyceno embryoskopem (ENG)

Více o prodloužené kultivaci na modrykonik.cz

• Diskuze: Jak dlouhou jste měly kultivaci embryí? Chytila se?
• Diskuze: Transfer čtyřbuněčných embryí po 48 h, je to špatně?
• Diskuze: PGD. Vaše zkušenosti, výsledky, kde a proč.

Použité zdroje

1. https://www.sanatoriumhelios.cz/prodlouzena-kultivace/
2. https://cs.wikipedia.org/wiki/Oplodnění_ve_zkumavce

Použité zdroje obrázků

1. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a8/Mouse_blastocyst-microscopy.png